恒遠生物|人信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)ELISA實驗說明

檢測范圍：2.5pg/ml-85pg/ml





使用目的：




本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)含量。




實驗原理：




本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)水平。用純化的人信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)，再與HRP標(biāo)記的信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)濃度。




標(biāo)本要求 ：




1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。




2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。




操作步驟：




1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。




80pg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40pg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20pg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10pg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5pg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液




2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。




3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  




4.配液：將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍（48T的20倍）稀釋后備用。




5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。




6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。




7.溫育：操作同3。




8.洗滌：操作同5。




9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。




10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。




測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。




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